Герпесвирусы сухопутных черепах

Введение

Герпесвирусные инфекции ши­роко распространены и встреча­ются у большого количества жи­вотных, включая рыб, амфибий, рептилий³¹ и даже беспозвоноч­ных моллюсков⁸.

Порядок вирусов Herpesvirales со­держит большое количество вирусов с оболочкой и двухцепочечной ДНК, имеющих общие структурные, генети­ческие и биологические свойства и ши­рокий круг заражаемых хозяев. Поря­док делится на 3 семейства^8,11. Одно из этих семейств - герпесвирусы - содер­жит вирусы, заражающие млекопитаю­щих, птиц, рептилий, и, в свою очередь, подразделяется на 3 подсемейства: Alpha-, Beta- и Gammaherpesvirinae. Члены этих подсемейств упоминаются как альфа-, бета- и гамма-герпесвиру­сы соответственно^8,11.

TeHV-1 и TeHV-3 - первые герпесви­русы, выделенные от сухопутных че­репах. На данный момент они лучше всего изучены и описаны²⁵. TeHV-3 ча­ще всего обнаруживается у домашних черепах и, как правило, ассоциируется с высоким уровнем заболеваемости и смертности рептилий, в то время как TeHV-1 обычно протекает в виде эпизо­отии и сопровождается низким уров­нем заболеваемости и смертности²⁴. Согласно исследованиям¹⁶, результа­ты тестирования среднеазиатских че­репах (Testudo horsfieldii) на наличие TeHV-1 значительно чаще, по сравне­нию с другими видами этих рептилий, оказываются положительными ¹⁶.

Герпесвирус черепах 3 (TeHV3) яв­ляется наиболее распространенным и патогенным. Все виды черепах счи­таются восприимчивыми к TeHV-3, но существует различная видовая чув- ствительность^23,25. Наиболее воспри­имчивы европейские сухопутные чере­пахи (Testudo), в частности балканские (Testudo hermanni) и среднеазиатские (Testudo horsfieldii)^8,22,25, в то время как средиземноморские черепахи (Testudo graeca) относительно устойчивы к TeHV-3, хотя и они иногда заболевают. Эта разница в ответе на инфекционный агент должна учитываться и предпола­гать возможность исключения контак­тов различных видов черепах во время их лечения и содержания¹¹. Молодые черепахи, как правило, более воспри­имчивы к TeHV-3, чем взрослые (смерт­ность среди зараженных молодых черепах может достигать 100%). Для TeHV-3 часто характерна сезонность, при этом пик заболеваемости на­блюдается ранней весной и осенью²⁵. Предполагаемый механизм переда­чи вируса предусматривает близкий контакт, однако недавно сообщалось о вероятной вертикальной передаче TeHV-3¹⁷. Исследования, включающие экспериментальное заражение че­репах, показали, что интраназальное и внутримышечное введение живых вирусов также способно вызывать по­явление клинических симптомов заболевания²¹.

TeHV-2 и TeHV-4 были выделены не так давно, и сейчас о них представлено ограниченное количество информации²⁵.

TeHV-2 - вирус герпеса, обнаружен­ный у домашних и диких пустынных западных гоферов (Gopherus agassizii). О проявлениях клинических симпто­мов вируса герпеса у данного вида черепах было известно с 1982 г. ⁹ , од­нако до 2005 г. не предпринималось никаких попыток выделить этот вирус, поэтому невозможно подтвердить связь с TeHV-2 во всех случаях выяв­ления клинических признаков гер­песвирусной инфекции у пустынных западных гоферов²⁵. На сегодняшний день этот вирус обнаружен и выделен только в США²⁶.

Предполагается, что TeHV-2, не­смотря на его генетические отличия от TeHV-3, скорее всего, имеет общие антигенные детерминанты с послед­ним, так как при непрямом иммуно- ферментном анализе (ELISA) антитела против TeHV-2 перекрестно реагируют с антигеном TeHV-312. Возможно ли заражение других видов черепах дан­ным вирусом, до сих пор неизвестно. Для ответа на этот вопрос необходимо проведение дополнительных исследо­ваний.

TeHV-4 был открыт самым послед­ним из четырех видов TeHV. Он был выделен у бессимптомной дикой юж­ноафриканской клювогрудой черепахи (Chersina angulata)². Других случаев обнаружения TeHV-4 не наблюдалось до 2016 г., и считалось, что данный вирусный генотип может быть обнару­жен только у одного вида черепах², что предполагало ограниченное распро­странение вируса в пределах ареала обитания вида-носителя (Южная Аф­рика и Намибия)²⁵. Однако в 2016 г. (в Германии) у одной черепахи из группы внезапно погибших леопардовых че­репах (Stigmochelys pardalis), имевших респираторные патологии, с помощью ПЦР был выделен герпесвирус, ДНК которого на 99% совпала с ДНК TeHV-4. Некоторые из этих черепах имели ре­спираторные симптомы (одышка, ды­хание через рот, выделения из носа)¹⁵. Но с учетом обнаруженных у этой же черепахи бактерий Mycoplasma spp. невозможно утверждать, что клини­ческие симптомы были вызваны непо­средственно TeHV-4.

Клинические признаки

Болезнь характеризуется пораже­нием верхних отделов респираторного и пищеварительного трактов. Клини­ческие признаки зависят от несколь­ких факторов, включая вид черепахи, штамм вируса, возраст животного и временной период, в течение которо­го происходит заражение.

Основные клинические признаки: выделения из носа, ринит, конъюнктивит, ассоциированный с блефароспазмом, дифтероид- нонекротический стоматит, отек шеи, анорексия и потеря веса (фото 1) 8,10,23,24,25,31.

Дифтероидно-некротические бляш­ки в ротовой полости могут достигать довольно крупных размеров, приводя к гипорексии или анорексии у репти­лий. Патогенетический механизм, от­ветственный за возникновение этих поражений, неизвестен так же, как неизвестна и причина их появления (являются косвенным побочным эф­фектом или возникают вследствие прямого воздействия вируса)²³. При экспериментальном заражении че­тырех греческих черепах²¹ только у двух из них дифтероидно-некротические бляшки стали развиваться спустя 11-12 дней после введения вируса (одна была заражена интраназально, вторая - внутримышечно). После максимального увеличения в разме­рах бляшки начали регрессировать и исчезли у одной черепахи (заражен­ной интраназально), в то время как у второй наблюдалась лишь частичная регрессия. У двух оставшихся экспе­риментально инфицированных чере­пах из данного исследования бляшки не появились. Данный факт позволяет предположить, что полное отсутствие дифтероидно-некротических бляшек у зараженных черепах не может ис­ключать наличия у них герпесвирус­ной инфекции²¹.

Герпесвирус-ассоциированный ри­нит часто характеризуется наличием прозрачных серозных выделений из носа в начале заболевания, которые могут становиться гуще и превращать­ся в слизисто-гнойные. В отдельных случаях возможно поражение нижних дыхательных путей²³.

Конъюнктивит - еще один клиниче­ский клиниче­ский признак, связанный с герпесви­русной инфекцией у черепах, при этом наблюдаются монолатеральный или двусторонний конъюнктивит, отек век (фото 2), часто сопровождающийся во­дянистыми или слизистыми выделения­ми из глаз. В самых тяжелых случаях че­репахи не могут самостоятельно открыть глаза. Конъюнктивит может возникать повторно после периодов ремиссии раз­личной продолжительности (от несколь­ких дней до нескольких недель)^23,24.

У некоторых черепах, зараженных вирусом герпеса, были описаны не­врологические симптомы (движения по кругу, тортиколлис). Патогенетиче­ский механизм, объясняющий разви­тие заболевания ЦНС и появление свя­занных с ним клинических признаков, неизвестен^23,25. Предполагается, что самая вероятная причина возникно­вения клинических признаков со сто­роны нервной системы - колонизация головного мозга вирусом герпеса и его рецидивирующая реактивация из ла­тентного состояния^18,20,22.

Механизм реактивации вируса непредсказуем^2,3, и неизвестно, что мо­жет способствовать его запуску. При этом реактивация вируса из латент­ного состояния может возникать как с наличием, так и с отсутствием клини­ческих признаков²².

Диагностика

Первый этап диагностики любого заболевания - это тщательный сбор анамнеза, в процессе которого следу­ет обращать внимание на то, как давно была приобретена черепаха и откуда привезена, имела ли она контакт с не­давно приобретенными животными, и, конечно, на условия ее содержания. Наиболее часто приобретаемые в Рос­сии сухопутные черепахи - среднеази­атские (Testudo horsfieldii). Большое ко­личество этих животных было изъято из дикой природы и ввезено на террито­рию Российской Федерации незаконно, так как на текущий момент данный вид занесен в Красную книгу и относится ко второму приложению международной конвенции CITES, запрещающей или строго регламентирующей торговлю этими животными. Учитывая предпо­ложительное скученное содержание этих рептилий при перевозках, способ­ствующее заражению животных (в том числе герпесвирусом), и их природную восприимчивость к данному заболева­нию, герпесвирус среди среднеазиат­ских черепах, ввезенных в Российскую Федерацию, может встречаться до­статочно часто. Клинически здоровые новоприобретенные среднеазиатские черепахи должны рассматриваться как вероятные носители вируса и прохо­дить обязательное карантинирование, особенно если предусматривается их совместное содержание с другими че­репахами.

При проявлении хотя бы одного из описанных выше симптомов (стоматит, монолатеральный или билатераль­ный конъюнктивит, неврологические расстройства, а также клинические признаки заболеваний верхних дыха­тельных путей), необходимо вносить герпесвирус в список дифференциаль­ных диагнозов ²³.

Однако важно учитывать, что ни один из описанных выше кли­нических признаков не является строго патогномоничным для ин­фекций TeHV.

Респираторные заболевания черепах также часто являются причинами раз­вития конъюнктивита и ринита, а появ­ление данных клинических симптомов у черепах часто связано с присутствием патогенных микоплазм (M. Agassizii и других)^3,4,23. В отдельных случаях воз­можны коинфекции. В одном из ис- следований¹⁶ среди 1015 тестируемых черепах из 5 семейств (Testudinidae [n = 832], Emydidae [n = 26], Geoemydidae [n = 16], Kinosternidae [n = 2], Chelidae [n = 2]) бактерии Mycoplasma spp. бы­ли обнаружены у 42,1% исследуемых черепах, а герпесвирусы - у 8,0%. При этом Mycoplasma spp. и TeHV-1 были одновременно обнаружены у 3,0% , а Mycoplasma spp. и TeHV-3 - одновре­менно у 2,3% черепах (данные о кли­нических симптомах в большинстве случаев не предоставлялись). Результа­ты исследования говорят о том, что на­личие у черепах Mycoplasma spp. не ис­ключает возможности заражения этих животных герпесвирусом, и наоборот.

Ключевую роль в дифференциации герпесвируса и других заболеваний играет наличие стоматита с дифтеро- идно-некротическими бляшками. У черепах с заболеваниями верхних ды­хательных путей данные клинические признаки отсутствуют. Однако отме­чается, что не у всех черепах, больных герпесвирусом, наблюдается форми­рование бляшек²³.

Похожие дифтероидно-некротичес- кие бляшки могут быть ассоциированы также с иридовирусом и ферлавиру- сом^19,25. Предполагается, что форми­рование бляшек связано с распростра­ненной патогенетической реакцией, которая активирует ответ клеток хозя­ина на различные этиологические при- чины²³.

Лабораторная диагностика

Разработанной лабораторной диагностики в России нет. Диа­гноз зачастую ставится на основа­нии клинических признаков без лабораторного подтверждения.

В США и ряде других стран Европы доступна диагностика с помощью ре­акции сывороточной нейтрализации (SN), иммуноферментного анализа (ELISA), молекулярных тестов (в основ­ном ПЦР), а также вирусной изоляции и электронной микроскопии²⁵.

В некоторых случаях подтвердить наличие герпесвируса у черепах мож­но с помощью цитологического ис­следования (фото 3)³². В одной из публикаций³² сообщалось о проведении у 45 черепах (Testudo horsfieldi) с раз­личными клиническими симптомами, характерными для герпесвируса, цито­логического исследования, материал для которого был получен путем мяг­кой скарификации поверхности языка и переднего отдела ротовой полости. По результатам данного исследования у 20 из 29 черепах с наличием дифтероидно-некротических бляшек и у 8 из 16 черепах с такими симптомами, как нарушение аппетита, депрессия и дегидратация, были выявлены внутри­ядерные ацидофильные тельца-вклю­чения, многоядерные клеточные син­цитии и другие аномалии, вызванные герпесвирусной инфекцией³².

Лечение и профилактика

Инфицированных герпесвиру­сом животных необходимо изо­лировать от других черепах. Карантинирование новых рептилий должно составлять не менее 6 месяцев¹⁰.

Перед началом лечения важно провести комплексную диагностику, включающую клинический и биохи­мический анализы крови, рентгено­логическое исследование, паразито­логическое исследование кала, чтобы оценить общее состояние черепахи и исключить другие причины возник­новения болезни и возможные сопут­ствующие патологии.

Герпесвирусы - одна из немногих групп вирусов, для которых существует эффективная противовирусная тера­пия. Традиционно с целью снижения репликации вируса используют анало­ги нуклеотидов (нуклеозиды), среди которых самым известным и широко используемым является ацикловир²⁵.

В 1997 г. было проведено исследо­вание, по результатам которого было доказано, что ганцикловир и ацикло­вир способны ингибировать реплика­цию герпесвируса у черепах in vitro¹⁸.

Для лечения черепах, зараженных герпесвирусом, традиционно назнача­ют ацикловир системно в дозировке 80 мг/кг/сутки и/или местно. Однако, в исследовании 2007 г. ⁶ ацикловир в указанной дозировке (80 мг/кг) приме­няли клинически здоровым окаймлен­ным сухопутным черепахам (Testudo marginata), и результаты продемон­стрировали, что концентрации пре­парата, достигаемые в плазме крови исследуемых черепах после перораль­ного приема ацикловира, были ниже, чем ингибирующие репликацию вируса in vitro⁶. McArthur также описывал не­однозначную эффективность ациклови­ра при его использовании для лечения герпесвируса у черепах²³, что указывает на необходимость в исследовании дей­ствия других антивирусных препаратов.

В 2019 г. были проведены исследо- вания⁷ 10 химических соединений, об­ладающих антивирусной активностью, с использованием культур клеток, что­бы выявить их клеточную токсичность и способность ингибировать TeHV-3. Из них 8 показали разные уровни активно­сти против TeHV-3 вместе с отсутствием или незначительным цитотоксическим действием на клетки (PMPDAP, аци­кловир, фосфономуравьиная кислота [PFA], ганцикловир [GCV], эпроцикло- вир [EPV, ранее известный как ципро- фир/ciprofir], адефовир [ADV], цидофо- вир [CDV], 9- (2-фосфонилметоксиэтил) гуанин и тенофовир [TFV])⁷.

Для дальнейших исследований был выбран эпроцикловир. Клинически здоровые черепахи (T. hermanni) полу­чали эпроцикловир в дозировке 5 или 10 мг/кг (подкожно). У черепах, получав­ших эпроцикловир в дозировке 10 мг/ кг/сутки, на 7-й день после начала лече­ния появлялись апатия и анорексия. На протяжении всего периода исследова­ния не удалось достичь ингибирующей концентрации препарата в сыворотке крови. Эксперимент проводился в тече­ние 14 дней, после чего биохимические и патологоанатомические исследова­ния выявили явные нефротоксические эффекты эпроцикловира⁷.

Для определения эффективности и токсичности остальных соединений, проявлявших антигерпесвирусную ак­тивность, необходимо проведение до­полнительных исследований.

Kevin Wright в 2008 г. описал исполь­зование в своей практике препарата «Виролиз» (1,25 мл/кг перорально 2 раза в сутки) в качестве дополнения к классической схеме лечения ацикло­виром, основываясь на способности пероральных лизинов контролировать вирус герпеса у млекопитающих¹⁴, од­нако нет актуальных исследований, доказывающих эффективность приме­нения данного препарата у рептилий.

При необходимости осуществляется поддерживающая терапия (инфузион­ная терапия, антибиотикотерапия для контроля вторичных инфекций, небу- лизация)^14,24,25,35. При наличии обшир­ных поражений в ротовой полости про­водят хирургическое удаление бляшек. Для осуществления ассистированного кормления рептилий (при необходи­мости) и при назначении длительных курсов терапии пероральными пре­паратами рекомендуется постановка эзофагостомы.

Прогноз зависит от многих факторов, таких как иммунный статус черепахи, наличие прогрессирующих заболева­ний и вторичных инфекций, а также от своевременного начала терапии²³.

Заключение

На сегодняшний день наибо­лее эффективным способом «ле­чения» герпесвируса у черепах является его профилактика.

На данный момент существует де­фицит объективной информации о герпесвирусах черепах. До сих пор не­известен патогенетический механизм, объясняющий возникновение связан­ных с данным заболеванием клиниче­ских признаков.

Доказано, что герпесвирус может вызывать у черепах симптомокомплекс ринита и стоматита²¹, однако неизвестно, является ли он единствен­ным этиологическим объектом, ответ­ственным за возникновение данного синдрома, или в эти процессы также вовлечены другие патогены.

В пределах России серологическая диагностика и ПЦР-исследование не­доступны. Это означает, что в большин­стве случаев отсутствует возможность точной постановки диагноза. Цитоло­гическое и гистологическое исследова­ния позволяют выявлять изменения в тканях лишь в определенные периоды заболевания.

Диагноз ставится преимущественно на основании клинических признаков, которые, в свою очередь, могут быть характерными также и для ряда других патологий.

Терапевтические протоколы явля­ются экспериментальными и, соглас­но опубликованным исследованиям, имеют неоднозначную эффектив­ность (McArthur, 2002)²³. Для разра­ботки эффективной схемы лечения необходимо проведение дальней­ших исследований, включающих определение способности противо­вирусных препаратов ингибировать репликацию вируса в организме и рассматривающих возможные токси­ческие эффекты противовирусной те­рапии с учетом физиологии конкрет­ных видов черепах.

Прасолова Д. М., ветеринарный врач, специалист по болезням экзотических животных. Сеть ветеринарных центров «Котонай», г. Санкт-Петербург.

Ветеринарный Петербург 2/2021

⇓ Скачать PDF статьи