РЕЗУЛЬТАТЫ
В мазках крови средиземноморских черепах у 54.5% особей (10 самок и 2 самца) были обнаружены внутриэритроцитарные паразиты Haemogregarina spp., которые являются наиболее распространенными паразитами крови черепах (Adl et al., 2012), имеют сложный жизненный цикл, включающий мерогонию и образование гематоцитов в эритроцитах позвоночного хозяина, а также гамогоний и спорогоний в кишечнике беспозвоночного переносчика (пиявки) (Siddall, Desser, 2001; Telford, 2008). Остальные особи (4 самца и 6 самок, 45.5% от собранных особей) оказались здоровыми. Экстенсивность инвазии, средняя интенсивность инвазии, индекс обилия, а также доля зараженных клеток у самок была значимо выше по сравнению с самцами (z = 1.85, р = 0.032) (табл. 1), что позволяет прийти к заключению о том, что самки более склонны к инфицированию гемогрегаринами, чем самцы.
У исследованных инфицированных особей наблюдали разные стадии развития апикомплексовых гемопаразитов, расположенных внутри эритроцитов периферической крови: гаметоциты и трофозоиты (рис. 2). Гаметоциты имели овальную форму с зернистым ядром (см. рис. 2, а). Зрелые трофозоиты были (Т-образной формы, с частично сросшимися ответвлениями разного размера, образующими большое овальное тело, заключенное в капсулу, и ядром (см.рис.2, б).
Интенсивность инфицирования черепах варьировала от 0.2 до 4.2% (процент зараженных эритроцитов) (табл. 2). В образцах крови трофозоиты встречались в 54.2% случаев заражения, достаточно часто встречались и гаметоциты (45.7%). В литературе есть сведения, что чем меньше времени прошло с момента заражения черепах, тем выше процент трофозоитов, меньше число гаметоцитных форм и инфицированных эритроцитов (Mihalca et al., 2002). Нашим исследованием установлено, что при высокой интенсивности инфицирования гаметоциты (р = 0.77, p = 0.003) и трофозоиты (р= 0.74, p= 0.005) в эритроцитах черепах встречались с равной вероятностью.
Следует отметить отсутствие корреляционной связи между длиной карапакса и паразитарными формами (р= 0.07, p= 0.82), хотя в литературе встречаются сведения о повышенном содержании трофозоитов в крови крупных инфицированных черепах по сравнению с мелкими особями и преобладании гаметоцитов у мелких черепах (Mihalca et al., 2002).
По лейкоцитарному составу крови и лейкоцитарным индексам (лимфоцитарно-гранулоцитарного, сдвига лейкоцитов, отношения лимфоцитов и эозинофилов, отношения гетерофилов и эозинофилов, отношения гетерофилов и лимфоцитов) различий между инфицированными и здоровыми самками и самцами не выявлено. Относительное содержание гранулоцитов и агранулоцитов в четырех группах было сопоставимо (табл.3).
Усредненные значения показателей лейкограммы для здоровых и инфицированных самцов и самок характеризовались лимфоцитарным профилем, что свидетельствовало о преобладании специфической (лимфоцит-зависимой) составляющей в иммунных реакциях особей (табл.4).
Регрессионным анализом выявлена зависимость возрастания доли эозинофилов в периферической крови с содержанием в эритроцитах трофозоитов (рис. 3), но не гаметоцитных форм гемопаразита. Уравнение регрессии, аппроксимирующее линейную зависимость между изученными показателями, имело вид: Эозинофилы, % = 8.8484 + 0.996 х (r = 0.614, p = 0.033, R2 =0.377). Результаты множественной регрессии свидетельствовали о значимости отличий от нуля коэффициента линей- ной регрессии, в = 0.37, и стандартной ошибки, Se = 0.15, p = 0.03.
Полученные результаты показывают, что паразитические формы Haemogregarina spp. могут оказывать влияние на лейкоцитарный состав крови и иммунный ответ средиземноморской черепахи.
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
Последствия инфицирования гемогрегаринами для системы крови рептилий до конца не ясны, но есть сведения, что высокая интенсивность заражения у пресноводных черепах вызывает относительный лимфоцитоз и гетеропению, при этом наличие гаметоцит- ных форм связано с возрастанием числа эозинофилов и снижением количества моноцитов (Mihalca et al., 2002). Другие исследователи сообщают об отсутствии клинических признаков (Mihalca et al., 2008) и различий в дифференциальном количестве клеток крови у рептилий (пресноводных змей) при инфицировании (Salakij et al., 2002).
Связь между иммунитетом и паразитами достаточно сложная. Напомним, что развитию паразита в организме хозяина способствует такой феномен, как иммунологическая индукция, которая заключается в способности паразита изменять процесс синтеза белка с образованием общих белковых антигенов (Малютина, 2008). Поэтому иммунитет при инфицировании бывает неярко выражен, характеризуется слабым напряжением и кратковременным действием, зависит от физиологических и экологических особенностей паразитов (Шевкопляс, Лопатин, 2008), при этом сравнительный анализ крови инфицированных и здоровых особей может не показывать каких-либо различий. Известно, что гемогрегарины влияют на общее состояние животных, вызывая снижение значения гематокрита, гемоглобина и количества эритроцитов у инфицированных особей (Thrall et al., 2004; Stacy et al., 201 1). При нарастании интенсивности инфекции гемогрегарины, несущие широкий спектр поверхностных антигенов, по всей видимости, распознаются хозяином как нечто генетически чужеродное, вызывая ответные иммунологические реакции и эозинофилию. По своим цитохимическим свойствам эозинофильные гранулоциты являются первичными эффекторными клетками со специфической анти-паразитарной функцией, и возрастание в крови доли этих клеток при инфицировании обеспечивает усиление защитных реакций организма (Шевкопляс, Лопатин, 2008).
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Наше исследование является первым, в котором проведена оценка адаптивных реакций системы крови здоровых и зараженных гемопаразитами средиземноморских черепах. Полученные результаты предоставили доказательства влияния интенсивности инфицирования гемопаразитами на иммунный статус черепах. Черепахи как долгоживущие, морфологически и экологически консервативные виды на протяжении своей жизни, вероятно, сталкиваются с самыми разнообразными патогенами, что приводит к развитию более сложной (опосредованной антителами) иммунной защиты, тогда как короткоживущие виды в большей степени полагаются на неспецифическую и воспалительную иммунную защиту. Однако их низкое видовое богатство и высокая степень антропогенной угрозы, а также изменения окружающей среды в пространственном и временном масштабах указывают на необходимость защиты и сохранения видов, подвергающихся серьезному риску исчезновения.
Полагаем, что выявление возможных вредных долгосрочных последствий инфицирования гемогрегаринами, контроль за состоянием здоровья и численностью T. g. nikolskii будет способствовать защите и сохранению этого редкого подвида черепах в Краснодарском крае.
