Леди Микоплазма

ЧАСТЬ 1

В этом интервью со всемирно известным ученым – профессором Мэри Браун рассматриваются факторы возникновения заболеваний верхних дыхательных путей у сухопутных и водных черепах. Профессор состояла в группе ученых, работавших в 1992 г. над изучением Микоплазмы – организма, вызывающего заболевания верхних дыхательных путей черепах. Профессор Браун продолжила дальнейшее изучение сложных вопросов влияния болезни на черепах, и она неоднократно помогала организациям, занимающимся сохранением черепах в природе. 
Мы взяли интервью в Палмдейле 25 января 2003 года, когда профессор Браун приехала в Калифорнию для получения награды (Golden Tortoise Award) за вклад в спасение калифорнийских пустынных черепах (gopherus agassizii). 

Стефани Паппас
– Доктор Браун, благодарим Вас за то, что Вы согласились дать интервью для Tortuga Gazette. Как ученый и как человек, увлеченный черепахами, я неоднократно встречала Ваши исследования относительно заболеваний верхних дыхательных путей черепах на протяжении последних лет. Я считаю Вас лучшим экспертом по микоплазме – организму, вызывающему заболевания верхних дыхательных путей, о Вас также высоко отзывались Ваши коллеги: доктор Эллиот Джекобсон, доктор ветеринарной медицины Паул Кляйн, профессор и доктор Дэн Браун, которые посвятили много лет изучению болезней черепах. Пожалуйста, расскажите об этих людях и о вашей совместной исследовательской работе. 

Мэри Браун
– Залог успеха нашей работы состоял в том, что у нас собралась взаимодополняющая команда. Я являюсь экспертом по микоплазмозам, Элиот Джекобсон – ветеринар-герпетолог, Паул Кляйн специализируется в иммунологии, а Дэн Браун владеет инструментами молекулярной биологии.
Мы достигли результата, поскольку работали как одна команда, в которой каждый знал свое дело. Каждый открыл что-то новое для себя, и это усилило команду в целом. Все люди, о которых я говорила, в настоящее время работают в Университете Флориды. Кроме того, мы смогли подготовить многих специалистов, которые сейчас заняты в самых различных штатах и занимаются дальнейшем исследованием пустынных гоферов.

Стефани Паппас
– Доктор Браун, Вы упомянули, что основная часть Вашей работы была посвящена изучению болезни у пустынных черепах (Gopherus agassizii), скажите, а в настоящее время Вы продолжаете их изучение? 

Мэри Браун
– Заболевание верхних дыхательных путей у техасских гоферов вызывается тем же микроорганизмом - Mycoplasma agassizii (M. agassizii) что и у калифорнийских пустынных черепах. Фактически мы получили грант на специальную исследовательскую программу через Институт национального здоровья и Национальное научное сообщество. Программа исследований рассчитана на пять лет и будет фокусироваться на факторах распространения инфекции в среде диких популяций черепах. Мы будем изучать микробиологические факторы (каким образом бактерия влияет на состояние животного и каким образом организм животного отвечает на ее вторжение), а также изучим влияние человеческого фактора на популяцию. Надеемся, что это исследование поможет установить причину гибели черепах и причины, влияющие на уменьшение их репродуктивных способностей, мы узнаем, каким образом бактерия влияет на самцов и на самок. Изучение гоферов также поможет узнать, что происходит с калифорнийской пустынной черепахой. 

Стефани Паппас
– На протяжении многих лет до меня доходили слухи, что болезнь верхних дыхательных путей была занесена в дикие популяции черепах из-за выпуска черепах, содержащихся ранее в неволе. То есть якобы кто-то выпустил на волю черепах, несущих на себе доминирующую бактерию M.agassizii, после чего вся популяция стала подвержена болезни. Что Вы об этом думаете? 

Мэри Браун
– Мне кажется, что вокруг данного вопроса наблюдается много спекуляций при отсутствии научно-подтвержденных данных. На самом деле, когда вы выпускаете животное из неволи, риск заболевания очень велик. Разумеется, если вы выпустили больное животное, трудно установить, где именно оно заболело – в неволе или на свободе. Мы находили микроорганизмы M.agassizii у гоферов, у калифорнийских пустынных черепах, у коробчатых черепах в природных популяциях. В целом, M.agassizii имеет склонность к специализации для той или иной группы животных. Это означает, что микоплазма, которая заразит корову, никак не повлияет на козу. Ареал распространения той или иной формы микоплазмоза ограничен ареалом обитания животных, на которых может повлиять микроорганизм. Таким образом, этот микроорганизм не может передаваться от домашней собаки, но может быть распространен внутри популяции черепах в данной местности. Микоплазма может нормально существовать только внутри живого организма и плохо выживает во внешней среде, поэтому они выбрали для себя носовую полость. 

Стефани Паппас
– Откуда ученые узнали об этом?

Мэри Браун
– Существуют методы, позволяющие проверять гипотезы: чем более изолированную популяцию мы имеем, тем проще применять молекулярные инструменты. Молекулярная эпидемиология позволяет исследовать хромосомы и гены, чтобы протрассировать историю развития. В эволюционных терминах этот период эволюционирует очень быстро. Ах нет, всё это слишком сложно!

Стефани Паппас
– Можно ли объяснить это в более понятных терминах для наших читателей? 

Мэри Браун
– Я имею ввиду, что если заболевание возникло пять лет назад, то его проще отследить. Факт в том, что мы впервые обнаружили это заболевание 20 лет назад, с тех пор прошло слишком много времени и сейчас уже сложно точно установить, что случилось. Но самое главное – не откуда пошла болезнь, а как нам с ней бороться и предотвращать распространение среди пустынных черепах. Так вот, лучший способ сдерживать развитие и распространение заболевания – НЕ ВЫПУСКАТЬ ДОМАШНИХ ЧЕРЕПАХ. Домашние черепахи, страдающие поражением верхних дыхательных путей, могут прожить много лет, поскольку хозяева хорошо заботятся о них, у них также есть доступ к ветеринарной помощи при проявлении клинических симптомов. Если у Вас имеется домашняя черепаха, пожалуйста не выпускайте ее! Кроме того, микоплазма – лишь одна из причин возникновения клинических признаков болезни верхних дыхательных путей. Та, о которой мы точно знаем. Но существуют и другие возбудители заболеваний, о которых нам пока неизвестно, а ведь вы же не хотите стать причиной вспышки эпидемии среди дикой популяции черепах.

Стефани Паппас
– Доктор Браун, несомненно, отслеживание причин и истории возникновения заболевания очень сложно. Поэтому давайте поговорим об этиологии болезни. Вы не могли бы объяснить нашим читателям, что означает термин «этиология»?

Мэри Браун
– Этиология – это наука о причинах возникновения заболеваний, она позволяет ответить на вопрос, почему животное заболело. Существует замечательный научный метод, он называется постулатом Коха. Вы находите больное животное и берете у него образец микроорганизма. Затем изолируете его и выращиваете культуру. Потом подсаживаете ее здоровому животному, чистая культура должна вызвать то же самое заболевание у подопытных животных и может быть выделена из организмов этих животных. 
Мы использовали постулат Коха при изучении гоферов и калифорнийских пустынных черепах, и установили, что именно M. agassizii вызывает болезнь верхних дыхательных путей черепах. Сейчас мы развиваем еще одну гипотезу о том, что имеет место развитие комплекса очень похожих микоплазменных организмов и именно определенный их набор виновен в возникновении респираторных проблем. Это может быть не только M. agassizii. 

У нас есть основания полагать, что там задействован как минимум еще один организм -Mycoplasma cheloniae , который также влияет на развитие респираторного заболевания черепах. Микоплазменные инфекции в целом очень распространены, они вызывают болезни у людей, кур, индюков, свиней, крыс, мышей, коз и коров.

Стефани Паппас
– А эти микоплазмы остаются неизменными независимо от вида животного? 

Мэри Браун
– Нет! Они уникальны для каждого вида, и у каждой популяции может быть своя микоплазма. Это можно сравнить с неудачной женитьбой.

Стефани Паппас
– Доктор Браун, ранее Вы сказали, что M. agassizii была выявлена у калифорнийских пустынных черепах, у техасских гоферов и у коробчатых черепах. А Вы пробовали изучать другие виды черепах?

Мэри Браун
– Нет, мы проводили все исследования на изолированных группах этих трех видов. Но у нас также есть информация от зоопарков и частных коллекционеров, где удалось выделить микроорганизмы. 

Стефани Паппас
– Таким образом, у черепах происходит эта “неудачная женитьба” с бактерией, которую они носят в себе всю жизнь. Но как развивался этот несчастливый союз? 

Мэри Браун
– Основной вопрос, почему эта бактерия колонизировала среди рептилий, а не среди других животных? Это сложный и интересный вопрос, и у нас нет точного ответа на него, но есть гипотеза, которая может объяснить, в чем дело. Если обратиться к теории эволюции, то легко заметить, что рептилии – очень древние создания, птицы развивались параллельно, и только потом возникли млекопитающие. Мы думаем, что более ранние животные в эволюционной цепочке в чем-то схожи. Бактерии не нужно вырабатывать никаких особых протеинов для того, чтобы вжиться в организм животного. Эта бактерия хорошо приспособилась к окружению и имеет специальный метод опознавания, называемый рецепторным протеином. Представьте себе замок и ключ, например, замок на багаж, когда один ключ подходит к нескольким брендам чемоданов. У рептилий несложный «замок» когда нужен всего лишь один «ключ», чтобы получить доступ к разным видам. Вот почему M. agassizii может успешно колонизировать как на сухопутных, так и на водных видах черепах. 

Стефани Паппас
– Несколько лет назад, я прочитала, что все черепахи должны рассматриваться как потенциальные носители микоплазмоза. Каким образом черепахи передают заболевание друг другу и что могут сделать владельцы черепах, чтобы болезнь по крайней мере не распространялась на всю домашнюю коллекцию животных? 

Мэри Браун
– Первый и основной путь распространения микоплазмы – воздушно-капельный при прямом контакте черепах нос к носу. 

Стефани Паппас
– Это и называется горизонтальной трансмиссией?

Мэри Браун
– Горизонтальная трансмиссия означает передачу болезни от одного животного к другому. Вертикальная трансмиссия означает передачу от матери через яйцо к потомству. Мы знаем, что микоплазма может передаваться при прямом контакте, мы думаем также, что она способна передаваться на небольшие расстояния, если животное чихает или испускает сопли. Также известно, что если животное проявляет клинические признаки заболевания (выделения из носа и глаз, влажный нос и глаза) в это время заболевание передается активнее всего, поскольку в выделяемом секрете очень много микоплазмы. 
Для того, чтобы животное заболело, нужно, чтобы вокруг него было достаточное количество микроорганизмов микоплазмы и они должны быть способны прицепиться к носовой полости здорового животного. Как только это происходит, они закрепляются и начинают воспроизводить колонию. Когда у животного отсутствуют клинические симптомы, количество организмов невелико, и сложно выделить культуру. Когда животное демонстрирует признаки заболевания, культуру выделить намного проще. Так что мой совет, если вы заметили у одной из черепах признаки заболевания, поместите ее на карантин, отделите от других особей. И никогда не смешивайте виды черепах, потому что в итоге болезнь может распространиться на всю вашу коллекцию черепах. Лучшее, что вы можете сделать – не содержать вместе разные виды. Кроме того известно, что чем больше животных находится в одном террариуме или вольере, тем быстрее распространяется любая инфекция (не только микоплазмоз). Передача заболевания от одного животного другому является результатом многих факторов: как много микроорганизмов представлено, как часто у вас происходит контакт с животным, несущим на себе микроорганизмы, сколько времени микроорганизм может жить на руках, наличие общих зон питания или купания. 
Микоплазма очень восприимчива к дезинфекции. Чистящие средства отлично работают против микроорганизмов. Возьмите дезинфецирующее мыло для рук, и вымойте руки несколько раз. После этого можете смело брать в руки других черепах. 

Стефани Паппас
– На самом деле, я хотела об этом спросить: какие лучшие средства дезинфекции Вы порекомендуете, и можно ли передать болезнь через человеческие руки когда вы прикасаетесь к нескольким черепахам по очереди? 

Мэри Браун
– Мы конечно стараемся перестраховываться, поскольку хочется избежать подобных ситуаций. Например, отправляясь в поле, мы дезинфецируем весь инвентарь и моем руки после каждого животного. Мы также используем различные перчатки для каждой особи. Всегда лучше перебдеть, чем недобдеть в этом вопросе. Проблема в том, что микоплазма – лишь один из источников заболеваний. Куда опаснее вирусы, которые более устойчивы к переменам среды. Дезинфекция помогает также против вирусов, к тому же это совсем просто и недорого. Имейте ввиду, что когда вы открываете и закрываете бутылку с дезинфецирующим средством, оно теряет свою эффективность и концентрацию, так что если вы купили большую бутылку, разделите ее на более мелкие, также старайтесь держать эти бутылки в темноте. Не все коммерческие средства дезинфекции одинаковы. Требуется, чтобы концентрация гипохлорида натрия составляла не менее 5.5% , такое средство разводится в соотношении 1 к 30, то есть на одну часть дезинфецирующего средства приходится 30 частей воды. Еще один важный момент: всегда работайте сначала со здоровыми животными и лишь затем – с больными, таким образом, вы сократите риск переноса болезни на здоровое поголовье.


ЧАСТЬ 2

Стефани Паппас
– Доктор Браун, Комитет по опеке из Калифорнийского Клуба Сухопутных и Водных Черепах каждый год получает множество больных черепах с сопливыми носами. Каким образом опекуны могли бы наилучшим образом помочь черепахам с инфекцией верхних дыхательных путей? 

Мэри Браун
– Самое главное – это поместить черепах с насморком на карантин, изолировать их от других и продезинфецировать то место, где ранее находились больные животные. Если вы используете пластиковые контейнеры, то очень легко промыть их дезинфецирующим средством, но если поверхность загрязнена, то вам придется побеспокоиться о том, что какие-то бактерии могли остаться. Если вы выделили участок земли с зеленью под выгул больной черепахи, то вам придется позаботиться о том, чтобы этот участок находился как можно дальше от здоровых черепах. Однажды мы провели небольшой опыт с черепахами гофер: мы вынули гофера с насморком из загона и тут же поместили на его место здоровое животное, однако трансмиссии на ноздри здоровой черепахи не произошло, но этот опыт мало что доказывает. Тем не менее, я подозреваю, что M. agassizii не может выживать на протяжении длительного времени, когда вы изъяли больную черепаху. Так что если загон простоял пустой неделю, то вы можете быть спокойны. Если вы дополнительно обработаете участок дезинфецирующим средством – то вам и вовсе не о чем волноваться. 

Стефани Паппас
– В целях предотвращения распространения заболеваний верхних дыхательных путей на здоровую популяцию черепах, некоторые природоохранные организации предлагают применять эвтаназию к животным, у которых обнаружен насморк. Что Вы об этом думаете? 

Мэри Браун
– Это очень деликатный вопрос, на который не так-то просто ответить! Одна из основных проблем, с которой мы сталкиваемся – это выбор между необходимостью сохранения диких популяций и неподдельной любовью людей к этим животным. Это непросто – провести животному эвтаназию. Существуют примеры, когда черепахи, являющиеся носителями M. agassizii, жили в неволе очень долго. Эти черепахи могут быть клинически больны, но симптомы будут то появляться, то исчезать. Помните, что это сезонное заболевание и животные не всегда будут выглядеть больными. При помощи антибиотиков можно добиться исчезновения симптомов. Конечно определенный вред дыхательной системе причиняется в любом случае, но если черепаха правильно питается и о ней заботятся – то она проживет очень долго. Такое животное никогда не излечится полностью, образцы микроорганизма будут оставаться с ним до конца жизни. В течение жизни такой черепахи симптомы будут появляться и исчезать, и вам придется лечить животное каждый раз при появлении симптомов. Если вы решили оставить такую черепаху – то обязаны нести за нее ответственность и не позволять ей заражать других черепах. Никогда не выпускайте подобную черепаху в природу, а если вы заметили симптомы болезни – отделите ее от остальных черепах в вашей домашней коллекции. 

Стефани Паппас
– Доктор Браун, а какой метод лечения инфекции верхних дыхательных путей Вы считаете наиболее эффективным, и есть ли какое-либо преимущество при введении лекарств с помощью инъекций перед преоральным методом введения лекарства? 

Мэри Браун 
– Одно из лучших средств – это Байтрил. Причем Байтрил есть Байтрил, не суть важно, ввели вы его преорально или при помощи инъекции. Мы опубликовали отчет о переносимости антибиотиков. Микоплазма чувствительна к Байтрилу, Тетрациклину и Доксициклину, но Байтрил легче переносится пищеварительным трактом животных. Лечение полностью зависит от того, как организм конкретного животного реагирует на антибиотик, но также зависит и от реакции черепахи на инфекцию: как далеко зашло заболевание и как долго проявляются клинические симптомы. Микоплазмоз – это то заболевание, в развитии которого участвует носитель (черепаха)! Если Ваша черепаха быстро приходит в норму при лечении, то поражение дыхательных путей будет совсем незначительным. С другой стороны, если черепаха невосприимчива к лечению, это говорит о том, что иммунитет черепахи сработал на бактерию, вызвавшую заболевание. 

Стефани Паппас
– Что Вы делаете, когда лечите черепаху более 20 дней, по 3-4 раза, а сопли продолжают течь? 

Мэри Браун
– Если у животного сохраняется хороший аппетит и активность, это говорит о том, что черепаха нормально переносит инфекцию. О ком следует беспокоиться – так это о черепахах, впадающих в состояние летаргии и полностью отказывающихся от еды. Это признаки того, что болезнь зашла очень далеко. Большинство черепах с проблемами верхних дыхательных путей отлично чувствуют себя в неволе при правильном уходе, но мы сталкивались и со случаями лавинообразного ухудшения состояния, когда у животного не было шансов выжить. Помните, что я - исследователь, а не ветеринар.

Стефани Паппас
– Хорошо, в таком случае давайте сосредоточимся на некоторых вопросах о способах трансмиссии болезни. Ранее мы обсудили горизонтальную трансмиссию, но не успели поговорить о вертикальной – от матери к яйцу. 

Мэри Браун
– Те сведения, которые имеются у нас о передаче болезни к яйцу от родителя в настоящее время недостаточны и не являются окончательными. Мы знаем, что Mycoplasma gallisepticum может передаваться к яйцу у домашних птиц, но это происходит лишь в 10% случаев, причем лишь при определенных обстоятельствах. Кроме того, куры несут яйца каждый день, а черепахи – один или два раза в год. Вал Ланс и Дэвид Ростал изучали больных самок, у которых проявлялись клинические признаки заболевания. Как минимум половина самок отложили яйца во время болезни. Итак, если в случае с птицами болезнь передается в 10% случаев к яйцу при ежедневной кладке, то можно ожидать такой же или меньший процент у черепах. Но чтобы отследить вертикальную трансмиссию, нужно изучить статистику как минимум по 100 кладкам и исследовать различные клинические стадии заболевания при различном состоянии скорлупы яиц. Если самка черепахи выделяет обильный секрет, в котором содержится большое количество микоплазмы, то появляется риск попадания микоплазмы в кровоток и последующей передачи яйцу. Если это происходит после того, как сформировалась скорлупа, то вполне возможно, что микоплазмоз не перейдет на яйцо. Дело в том, что трансмиссия на яйцо происходит довольно редко, и я не верю в то, что кто-то отдаст нам сотню кладок для изучения. В то время как существуют более интересные материалы для исследования и более важные вопросы, на которые можно ответить, не привлекая такого количества животных. Куда более важно, что нам известно о горизонтальной трансмиссии инфекций верхних дыхательных путей. Если зараженная черепаха отложила яйца и малыши, вылупившись, контактируют со взрослым, у которого обнаружено заболевание, то малыши вскоре будут очень серьезно больны. Так что вы должны быть уверены в том, что не оставляете черепашат вместе со взрослыми больными черепахами. 

Стефани Паппас
– Доктор Браун, если у черепахи наблюдаются выделения из носа, означает ли это, что в ее организме имеются M. agassizii, а если у черепахи нет клинических симптомов болезни, то значит ли это, что у нее, напротив, отсутствует микоплазмоз? 

Мэри Браун
– Если у черепахи сопли, то это вовсе не означает автоматического диагноза микоплазмоз, поскольку насморк может быть вызван переохлаждением, аллергией, а иногда случается и после питья воды. Хотя если у черепахи изобильно выходит слизь из носа, я бы предположила, что такая черепаха больна. Тем не менее, причина может быть не в микоплазме, те же симптомы способны вызывать и другие патогенные микроорганизмы. Наиболее настораживает тот факт, что обильные выделения из носа появляются у черепах, которые на протяжении длительного времени выглядели здоровыми. Это самые сложные случаи! У нас были черепахи, которые давали отрицательную реакцию на культуру на протяжении года, но оказались серопозитивны к M. agassizii. Это означает, что микроорганизмы находились в них, но черепахи не проявляли никаких клинических симптомов, являясь при этом носителями болезни. Мы провели исследование таких черепах, подсадив им микроорганизмы, и все исследуемые особи очень быстро заболели. В первые две недели их болезнь протекала куда более мучительно, и у них выявлялось больше микроорганизмов, чем у животных, которые заболели в первый раз. Так что помните, что если ваша черепаха выглядит здоровой, но является носителем микроорганизма, то при повторном заражении животное заболеет очень-очень тяжело.

Стефани Паппас
– Доктор Браун, имеется ли какая-нибудь статистика по черепахам с клиническими симптомами. Сколько животных показало положительную реакцию на M. agassizi и сколько – отрицательную? 

Мэри Браун
– Мы изучили примерно шесть или семь тысяч гоферов и пустынных черепах. Большая часть образцов была получена через ветеринаров или из частных коллекций. Мы обнаружили высокую степень корреляции между клиническими симптомами такими как насморк и выделения из глаз. Клинически больные черепахи, которым провели гистологическое исследование, почти всегда показывали положительную реакцию на M. agassizi.
Хочу сказать, что более чем в 90% случаев диагноз подтверждался. Если вы посмотрите на черепах, которые были проверены на M. agassizi, то большинство окажется серонегативными. Примерно 25% или меньше дали положительную реакцию. Также хочу заметить, что наибольшее число положительных реакций было выявлено среди животных, содержащихся в неволе. Также у нас были случаи, когда животные отлично выглядели, казались абсолютно здоровыми, но давали положительную реакцию на пробы M. agassizi. 
И наибольший ущерб болезнь в конечном итоге наносила тем особям, которые выглядели здоровыми и при тесте оказывались серопозитивными. Так что здоровый внешний вид еще ни о чем не говорит.


ЧАСТЬ 3

Стефани Паппас
– Доктор Браун, теперь стало понятно, что черепаха, которая выглядит здоровой, тем не менее, может показать положительную реакцию на наличие M. agassizii, а могут ли коллекционеры и любители черепах смешивать в одном вольере одних черепах, которые выглядят здоровыми, с другими черепахами, которые выглядят здоровыми, не проводя тестов на микоплазмоз? И может ли черепаха, не проявляющая клинических симптомов, но являющаяся носителем болезни, заразить другую черепаху? 

Мэри Браун
– Точного ответа на эти вопросы никто не знает. Самое главное – руководствоваться здравым смыслом. Если животное не проявляет клинических симптомов, то это означает, что у него не очень много патогенных микроорганизмов. Хотя, если вы посадите вместе двух самцов, и они начнут драться, то это вызовет стресс и, как следствие, возможное распространение заболевания. Мы просто не знаем точно. Все зависит от конкретных владельцев черепах, но надо принимать во внимание, сколько животных содержится вместе, как давно за ними ведется наблюдение, и в, конечном счете, насколько важно для владельца сознание того, что он подвергает риску здоровых черепах. Если речь идет о нескольких видах черепах, то я бы не стала смешивать животных, потому что у черепахи может быть и другая болезнь, например какой-то вирус, который может оказаться смертельно-опасным для другого вида. Когда вы начинаете смешивать разные виды, то рискуете передать не только микоплазмоз. 

Стефани Паппас
– То есть Вы советуете нашим читателям ограничивать количество черепах на определенной площади и выделять как можно больше пространства для каждой черепахи? 

Мэри Браун
– Да, прислушайтесь к голосу разума. Чем больше животных находятся вместе, тем чаще их инфекции будут передаваться. Хочу привести пример, объясняющий, почему нельзя смешивать разные виды: микоплазмоз встречается и у американских аллигаторов, у аллигаторов и кайманов заболевание приводит к быстрому летальному исходу. То есть животное гибнет обычно в течение 2-х недель от сепсиса и сопутствующих инфекций. Хотя у крокодилов последствия заболевания менее фатальны: микоплазмоз вызывает лишь проблемы с миндалинами. Летальные последствия микоплазмоза были впервые замечены у американских аллигаторов и кайманов на обширной территории, где жили разные виды животных. Так почему это заболевание оказалось смертельным для аллигаторов и кайманов? Учтите, что бактериальные и вирусные инфекции могут легко переноситься одним видом животных и передаваться другим, приводя к ужасным последствиям. Классические примеры таких инфекций – лихорадка эбола, ВИЧ и западно-нильский вирус. Лучше всегда вспоминать эти примеры, прежде чем сажать вместе разные виды черепах и наблюдать потом за гибелью всей коллекции. 

Стефани Паппас
– Доктор Браун, мы достаточно подробно обсудили способы передачи заболевания, а теперь хотелось бы сфокусироваться на методах диагностики. Некоторые люди утверждают, что иммуноферментный анализ (ELISA или ИФА), используемый для диагностирования M. agassizii, недостаточно надежен. Не могли бы Вы объяснить, что такое тест ИФА и как можно узнать, является ли ваша черепаха носителем Mycoplasma agassizii? 

Мэри Браун
– Тест ИФА позволяет определить, сколько антител (т. е. титр антител – прим. переводчика), распознающих специфические антигенные участки микоплазмы, находится в крови черепахи. Когда в тело животного попадает инородная субстанция (бактерия или вирус), то появляется иммунный ответ. А точнее, вырабатывается определенный белок, называемый антителом. Представьте себе микоплазму как блондинку с голубыми глазами в приталенном пальто. Когда носитель (черепаха) встречает микоплазму, он узнает в ней “блондинку в приталенном пальто”. Тест ИФА проверяет все белки-антитела, которые распознают микоплазму. Сам по себе тест проводится на твердой пластиковой плашке, которая имеет 96 лунок. В каждую лунку добавляем раствор антигена микоплазмы и позволяем ему покрыть плашку и абсорбироваться. Затем добавляется черепашья сыворотка (кровь). В ней содержится много антител, которые никак не распознают M. agassizii (в виде абсорбированного антигена – прим. переводчика), но если какие-то из них могут распознать микоплазму, то свяжутся с опознанным антигеном, в котором они узнают свою “блондинку в приталенном пальто”. После того, как произошло связывание, мы смываем не связавшийся с антигеном материал. Получается своеобразный бутерброд: пластик с антигеном микоплазмы, с которым связано антитело. Теперь мы должны пометить эти антитела черепахи, для чего мы заранее готовим специальный белок, который специфически реагирует на любые антитела черепахи. Эти антитела были разработаны Университетом Флориды. Они представляют собой моноклональные антитела к иммуноглобулину черепахи, с прикреплённым к ним ферментом – всё вместе это называется конъюгатом. При его добавлении происходит специфическое связывание с первым антителом и распознание иммуноглобулина черепахи. Затем лунка промывается и молекулы, которые не связались, удаляются. Добавляется специальный субстрат, который при контакте с ферментом конъюгата окрашивается в желтый цвет. После того, как все это проделано, определяется интенсивность желтого цвета при помощи специального прибора. Чем больше желтого, тем больше представлено антител, опознавших микоплазму и выше их титр, что означает положительный результат теста.

Стефани Паппас
– Насколько можно полагаться на тест ИФА и не могли бы вы уточнить, что означают положительная, отрицательная и подозрительная реакции? 

Мэри Браун 
– Тест ИФА - это наиболее наглядный способ идентификации M. agassizii. У нас есть процедура контроля качества и для каждого анализа проводится оценка при помощи сыворотки, где нам известен конечный титр антител к M. Agassizii (положительный контроль – прим. переводчика). Мы провели статистический анализ и построили график. Мы показали на этом графике линией, какие значения соответствуют положительному тесту, а какие – отрицательному. Для этого существуют специальные методики, которые мы ранее опубликовали. Положительный тест соответствует значениям от 128 в системе титров (это означает, что вне всяких сомнений имеет место наличие M. agassizii). Отрицательная реакция – все, что ниже этого значения, то есть M. agassizii не обнаружены. Хотя иногда можно получить отрицательную реакцию, если речь идет о первых 6 или 8 неделях заболевания или если инфекция верхних дыхательных путей черепахи вызвана не M. agassizii. Помните, что современные тесты ИФА используют антиген именно к M. agassizii и не определяют другой вид микоплазмы, потому что, например, M. cheloniae не даст такой же реакции. Результаты в «серой зоне» означают лишь, что тест следует повторить через какое-то время. Всего около 5% обследованных животных показали результаты теста в «серой зоне», так что процент сомнительных диагнозов очень небольшой. Даже при клиническом обследовании, если вы заранее знаете точно, что искать, вы можете получить положительный, отрицательный и «серый» результаты.

Стефани Паппас
– Случалось ли в Вашей практике, что животное, показавшее положительную реакцию, позднее показывало отрицательную?

Мэри Браун
– Вы никогда не увидите изменения подтвержденного положительного анализа на отрицательный. Единственное исключение – черепашата, в крови которых могут содержаться материнские антитела. Антитела могут передаться через желточный мешок, таким образом, у черепашонка будут антитела матери, которые со временем исчезнут. Мы точно не знаем, как долго материнские антитела могут оставаться в организме, прежде чем полностью исчезнуть. 

Стефани Паппас
– Доктор Браун, это было очень познавательное интервью, но прежде чем я отпущу Вас, расскажите нашим читателям, как Вы начали заниматься изучением бактерии микоплазмы? 

Мэри Браун
– Когда я покинула Бирмингем, я сказала людям в лаборатории, что мне неважно, где я буду работать, важно лишь, чтобы я продолжала работать с микоплазмой. Это то, что меня действительно увлекает. Я работала со многими видами, пораженными микоплазмой: исследовала анализы людей, крыс, мышей, коз, кур, черепах и других животных. Это моя специализация. Однажды я сидела в своем офисе, и Эллиот Джекобсон подошел с каким-то образцом и спросил: «Мэри, ты знаешь, что это такое?», я ответила: «Ух ты! Это же микоплазма, где ты ее достал?», он спросил: «Как думаешь, ее можно вырастить?», я ответила: «Конечно!», но тогда я еще не знала, что микоплазма окажется самым сложным микроорганизмом из тех, что я когда-либо выращивала. Вот тогда-то я и занялась подробным изучением микоплазмы, и мы открыли, что M. agassizii вызывает заболевание верхних дыхательных путей у черепах. Затем мы получили поддержку замечательных людей, работающих над проблемой сохранения пустынных черепах – Кристиана Берри, Кена Наги, Дэйва Морафка, Мэри Кристофер, и от студентов-ветеринаров, с которыми было очень приятно работать. Эти люди рассказали мне об экологии пустынных черепах, и мы работали все в одной команде. Когда я задумываюсь о своих профессиональных достижениях, то понимаю, что работа над пониманием причин заболеваний пустынных черепах, была одной из самых важных в моей жизни. 

Стефани Паппас
– В заключении, доктор Браун, что, по Вашему мнению, делает пустынных черепах такими важными для экосистемы и что бы Вы хотели посоветовать нашим читателям для сохранения этого вида? 

Мэри Браун
– Пустынные черепахи – это краеугольный камень всей экосистемы. Норы, которые они раскапывают, позволяют выживать многим другим пустынным животным. Черепахи могут быстро рассредоточиться на местности, они могут заранее предупредить об опасности: если черепаха умирает, то от нее остается панцирь, а если, к примеру, умерла амфибия, то от нее не остается ничего, что могло бы просигнализировать людям о грядущей беде. Инфекция верхних дыхательных путей – это лишь небольшая проблема на фоне всего того, что происходит с гоферами и пустынными черепахами. Куда более опасны не болезни, а разрушение естественной среды обитания черепах, экспансия человека и использование им пустынных земель в хозяйственных нуждах, и вся эта деятельность губит не только черепах, но и многих других животных, а также растения, которые исконно жили на этих землях. Даже если мы вылечим всех черепах, то какой в этом толк, если у них не останется земли для жизни? Если люди действительно хотят помочь пустынным черепахам, то они должны участвовать в работе Комитета по Сохранению Пустынных Черепах. Эти люди по-настоящему увлечены своим делом и делают все возможное для спасения черепах, даже выкупают землю, на которой могли бы обосноваться черепахи. Эти волонтеры получают знания и учат других, как сохранить пустыню и всех ее обитателей. Пустыня – это сложное и многообразное биологическое строение, и если вынуть из фундамента всего пару кирпичиков, то все здание может рухнуть.

Интервью с профессором Мэри Браун
(автор – Стефани Паппас, специально для Tortuga Gazzette, 4-6 мая 2003)
http://www.tortoise.org/archives/brown1.html

Автор перевода Anfi с помощью Rud